血清淀粉樣蛋白A（SAA）抗體的制備
SAA是一種急性時(shí)相蛋白，當炎癥或感染急性期在體內含量迅速升高，當感染得到控制后又會(huì )迅速恢復至正常水平，是常見(jiàn)的炎癥標志物。對體內SAA水平進(jìn)行檢測對于細菌及病毒感染的診斷具有重要的指導意義。
SAA抗體是SAA檢測試劑盒的核心原料，目前SAA抗體的制備可以分為利用雜交瘤技術(shù)制備和利用基因工程制備兩大類(lèi)，兩種生產(chǎn)方式在制備周期、實(shí)驗難度、抗體產(chǎn)量等方面有所區別，本文就SAA抗體的制備相關(guān)知識點(diǎn)做一個(gè)介紹。
雜交瘤技術(shù)制備SAA抗體
雜交瘤技術(shù)是目前主流的SAA抗體制備方式，利用SAA抗原蛋白免疫宿主（通常為Balb/c小鼠），對宿主進(jìn)行4-5次免疫后取其脾細胞與骨髓瘤細胞融合得到雜交瘤細胞。再對雜交瘤細胞進(jìn)行陽(yáng)性克隆篩選及單克隆篩選得到雜交瘤細胞單克隆。得到雜交瘤單克隆細胞株后，對細胞株進(jìn)行培養（可以將單克隆細胞株注入小鼠腹水進(jìn)行體內培養，也可以利用培養瓶進(jìn)行體外培養）即可得到鼠源SAA單克隆抗體。
對于免疫熒光、膠體金、膠乳比濁等免疫檢測平臺，僅僅有一株SAA抗體是不夠的，至少需要一對能夠同時(shí)與SAA蛋白結合的配對抗體才能夠完成對SAA蛋白的檢測。因此，需要篩選得到多株單克隆雜交瘤細胞株并制備得到多種不同的SAA單抗，利用雙抗夾心ELISA的方式進(jìn)行配對抗體的篩選。
基因工程技術(shù)制備SAA抗體
利用雜交瘤技術(shù)制備SAA存在雜交瘤細胞退化及批次產(chǎn)量少等問(wèn)題，利用基因工程技術(shù)可以很好的解決這些問(wèn)題。
體外重組技術(shù)制備重組SAA抗體首先需要獲得SAA的抗體序列（通過(guò)對雜交瘤細胞進(jìn)行測序即可獲得SAA抗體序列），抗體序列合成基因并將基因導入到載體之中構建表達質(zhì)粒，將構建好的質(zhì)粒轉入到合適的表達系統中（通常為哺乳動(dòng)物細胞表達系統）進(jìn)行重組表達，最后通過(guò)protein A/G純化得到重組SAA單抗。
與雜交瘤細胞相比基因序列是可以永久保存的，不用擔心因雜交瘤細胞退化而導致無(wú)法生產(chǎn)抗體的問(wèn)題。
哺乳動(dòng)物細胞表達系統
哺乳動(dòng)物細胞表達系統分為瞬時(shí)轉染和穩定細胞系構建兩種制備方式。瞬時(shí)轉染能夠快速的表達得到SAA抗體，但是產(chǎn)量較低。穩定細胞系構建的實(shí)驗周期比瞬時(shí)轉染長(cháng)，實(shí)驗難度也較大，但是利用穩定細胞系構建技術(shù)能夠實(shí)現SAA抗體的長(cháng)期、穩定、大量的生產(chǎn)。
如果SAA抗體的需求量很大，利用瞬轉技術(shù)需要進(jìn)行多個(gè)批次的制備才能夠滿(mǎn)足需求，此時(shí)會(huì )存在批間差的問(wèn)題，但是利用穩定細胞系構建則能很好的滿(mǎn)足客戶(hù)的需求（可一次性生產(chǎn)克級至百克級SAA抗體）。
雜交瘤技術(shù)與基因工程技術(shù)對比
| 雜交瘤技術(shù) | 基因工程 | |
| 原料 | SAA抗原 | SAA抗體序列 |
| 生產(chǎn)方式 | 免疫動(dòng)物 | 重組表達 |
| 周期 | 4-6月 | 2-4月 |
| 優(yōu)點(diǎn) | 技術(shù)門(mén)檻較低 | 產(chǎn)量高、批次間差異小 |
| 缺點(diǎn) | 得到抗體可能夾帶小鼠自身抗體（比例約為10%） | 技術(shù)門(mén)檻高 |
| 產(chǎn)量 | 少 | 可快速小量生產(chǎn)，也可大量生產(chǎn) |
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