免疫層析工藝常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案

Q1：用候選抗體檢測賦值樣本時(shí)靈敏度低，cut off值區間測不到。

方案：

1.通過(guò)換用大粒徑標記物，增加標記抗體和包被抗體的用量；如果采用的是競爭法測抗原，可以抗原用來(lái)標記，抗體用來(lái)包被，用獨立質(zhì)控系統。
2. 抗體本身性能達不到要求，更換原料。

Q2：用候選抗體檢測樣本時(shí)高值樣本測不到怎么辦？

方案：

1.此項目臨床上測定區間多少，如果靈敏度較高可以考慮稀釋一定倍數再測定。
2.線(xiàn)性上不去很有可能是標記抗體和包被抗體的用量不合適，理論上用量不足，但實(shí)際應用時(shí)并不一定，建議對標記抗體和包被抗體設置梯度進(jìn)行調試。
3.換用小粒徑的標記物，小粒徑的標記物比表面積大，結合的抗體量更多。
4.抗體親和性不佳，更換原料。

Q3：用候選抗體檢測已賦值的臨床樣本，相關(guān)性指標較差。

方案：

1.樣本來(lái)源及賦值數據是否可靠？樣本是否新鮮？有條件的話(huà)可以用對照試劑盒對樣本進(jìn)行檢測，以確定樣本的實(shí)際數值是否發(fā)生改變。
2.樣本中存在干擾成分，需篩選合適的阻斷劑。

Q4：標記好的抗體，封閉完了放在儲存液里，一兩天后有沉淀。

膠體金或是熒光微球標記后的抗體時(shí)間久了出現輕微沉淀很正常，渦旋或是水浴超聲沉淀即可消失，如果出現結塊沉淀，超聲后仍無(wú)法去除，則可能存在以下問(wèn)題：
1.標記體系中pH值不合適，導致在標記時(shí)就出現聚沉的現象，設置pH梯度進(jìn)行調試
2.封閉劑的成分或是用量不合適，導致金顆?；蚴俏⑶虮砻嬗新懵段稽c(diǎn)，在儲存時(shí)出現交聯(lián)聚集；調整封閉劑用量或更換封閉劑（廠(chǎng)家、種類(lèi)）再測試。
3.儲存液不合適，導致偶聯(lián)的復合物不穩定出現解離，需重新配制儲存液。

Q5：為了提升試紙條檢測上限，T線(xiàn)提升了包被用量，為什么信號并沒(méi)有增加？

NC膜結合蛋白的量是有限的，超過(guò)上限后多余的蛋白沒(méi)有結合或結合的不牢固，甚至會(huì )造成蛋白的堆積，形成空間位阻效應，致使檢測時(shí)信號會(huì )不再增加甚至降低。在調整工藝時(shí)，需要根據測試結果選擇合適的包被用量。

Q6：陰性組用樣本稀釋液進(jìn)行測試，T線(xiàn)出現假陽(yáng)性是因為什么？

這種假陽(yáng)是由于標記物和包被的蛋白非特異性結合造成的，項目中很常見(jiàn)，可從以下幾個(gè)方面解決：
1.在標記時(shí)更換封閉劑成分或是增加用量。
2.在不影響試劑靈敏度的情況下，降低標記和包被抗體用量，將整體信號壓下來(lái)，來(lái)消除這種本底信號。
3.增加離子濃度，或更換稀釋液，改用其他體系進(jìn)行嘗試。