膠體金技術(shù)常用方法
膠體金技術(shù)是一種將抗原抗體免疫反應與膠體金標記示蹤技術(shù)結合用于抗原、抗體含量定性定量檢測的技術(shù)。由于其快速、簡(jiǎn)便、成本低、穩定性好等優(yōu)點(diǎn)，膠體金法檢測在臨床檢測領(lǐng)域得到了廣泛的應用。
目前，膠體金檢測平臺常用的檢測方法有雙抗夾心法、競爭法、間接法等，不同檢測方法檢測原理及適合檢測的物質(zhì)不同，下面分別對這些方法做一介紹。
雙抗夾心法
雙抗夾心法是膠體金檢測平臺最常用的檢測方法，主要用于檢測比較大的生物分子及顆粒性抗原。雙抗夾心法需要準備待測抗原的配對抗體，一個(gè)抗體用膠體金標記并固定在結合墊上，另一個(gè)抗體固定在NC膜的檢測線(xiàn)（T線(xiàn)）上。另外，還需要準備能與金標抗體（即膠體金標記抗體）特異結合的二抗并固定于NC膜的控制線(xiàn)（C線(xiàn)）上。
圖1：雙抗夾心法膠體金檢測原理
圖2：雙抗夾心法膠體金檢測結果當待測樣品液體滴加到試劑條上后，通過(guò)層析作用，液體依次會(huì )運動(dòng)至結合墊、T線(xiàn)、C線(xiàn)，每個(gè)階段的反應如下表所示：
| 液體運動(dòng)至結合墊 | 液體運動(dòng)至T線(xiàn) | 液體運動(dòng)至C線(xiàn) | 結果 | |
| 樣品中含有待測抗原 | 待測抗原與結合墊上的金標抗體結合 | 待測抗原（已經(jīng)與金標抗體結合）被T線(xiàn)上的包被抗體捕獲，膠體金聚集并顯色 | 游離的金標抗體被二抗捕獲，膠體金聚集并顯色 | 兩條線(xiàn) |
| 樣品中不含待測抗原 | / | 包被抗體捕獲不到目的抗原，T線(xiàn)不顯色 | 游離的金標抗體被二抗捕獲，膠體金聚集并顯色 | 一條線(xiàn) |
因此，當試劑條上顯示兩條紅線(xiàn)時(shí)，表示樣品中待測物質(zhì)呈陽(yáng)性；當試劑條上只有一條紅色時(shí)，表示樣品中待測物質(zhì)呈陰性。待測物質(zhì)濃度越高，T線(xiàn)顯色強度越強。
競爭法
小分子抗原很難制備得到配對抗體（分子量小，很難找到兩個(gè)結合位點(diǎn)供兩個(gè)抗體同時(shí)結合），因此小分子抗原無(wú)法用雙抗夾心法進(jìn)行檢測。對于小分子抗原，通常利用競爭法進(jìn)行檢測。
使用競爭法的膠體金檢測平臺，在試劑條的結合墊上固定的是金標抗體，NC膜上T線(xiàn)固定的是大分子偶聯(lián)的待測抗原（小分子抗原不能直接固定于NC膜上，因此需要通過(guò)化學(xué)方法把小分子偶聯(lián)到BSA等大分子物質(zhì)上再固定與NC膜上），C線(xiàn)上固定的是能與金標抗體特異性結合的二抗。
圖3：競爭法膠體金檢測原理
圖4：競爭法膠體金檢測結果當待測樣品液體滴加到試劑條上后，通過(guò)層析作用，液體依次會(huì )流經(jīng)結合墊、T線(xiàn)、C線(xiàn)，每個(gè)階段的反應如下表所示：
| 液體運動(dòng)至結合墊 | 液體運動(dòng)至T線(xiàn) | 液體運動(dòng)至C線(xiàn) | 結果 | |
| 樣品中含有待測抗原 | 待測抗原與結合墊上的金標抗體結合 | 由于金標抗體已經(jīng)與待測抗原結合，故無(wú)法被T線(xiàn)上的抗原捕獲，膠體金不會(huì )發(fā)生聚集，T線(xiàn)不會(huì )顯色 | 游離的金標抗體被二抗捕獲，膠體金聚集并顯色 | 一條線(xiàn) |
| 樣品中不含待測抗原 | 結合墊上的金標抗體沒(méi)有抗原結合，結合位點(diǎn)未被占據 | 金標抗體被T線(xiàn)上的抗原捕獲，膠體金聚集并顯色 | 游離的金標抗體被二抗捕獲，膠體金聚集并顯色 | 兩條線(xiàn) |
因此，如果試劑條上有兩條線(xiàn)，則說(shuō)明樣品中待測物質(zhì)呈陰性；如果試劑條上有一條線(xiàn)，則說(shuō)明樣品中待測物質(zhì)呈陽(yáng)性。樣品中待測物質(zhì)濃度越高，T線(xiàn)顯色強度越弱。
間接法
間接法主要用于檢測抗體。如果膠體金檢測平臺使用的是間接法，則試劑條的結合墊上固定的是帶有膠體金標記的Protein A（Protein A能夠與抗體非特異性結合），NC膜上的T線(xiàn)固定的是能與待測抗體特異性結合的抗原，NC膜上的C線(xiàn)固定的是抗Protein A抗體。
圖5：間接法膠體金檢測原理
圖6：間接法膠體金檢測結果當待測樣品液體滴加到試劑條上后，通過(guò)層析作用，液體依次會(huì )流經(jīng)結合墊、T線(xiàn)、C線(xiàn)，每個(gè)階段的反應如下表所示：
| 液體運動(dòng)至結合墊 | 液體運動(dòng)至T線(xiàn) | 液體運動(dòng)至C線(xiàn) | 結果 | |
| 樣品中含有待測抗體 | 待測抗體與結合墊上的Protein A結合 | 待測抗體被T線(xiàn)上的抗原捕獲，膠體金聚集并顯色 | Protein A被Protein A抗體捕獲，膠體金聚集并顯色 | 兩條線(xiàn) |
| 樣品中不含待測抗體 | / | T線(xiàn)上抗原捕獲不到物質(zhì)，T線(xiàn)不顯色 | 金標抗體被二抗捕獲，膠體金聚集并顯色 | 一條線(xiàn) |
因此，如果試劑條上有兩條線(xiàn)，說(shuō)明樣品中待測物質(zhì)呈陽(yáng)性；如果試劑條上有一條線(xiàn)，說(shuō)明樣品中待測物質(zhì)呈陰性。樣品中待測物濃度越高，T線(xiàn)顯色強度越強。
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