抗體性能評估指標

抗體作為主要的體外診斷試劑核心原料對于整個(gè)免疫檢測分析系統有著(zhù)至關(guān)重要的影響。衡量抗體診斷原料質(zhì)量的技術(shù)指標沒(méi)有統一的標準，一般以活性/效價(jià)/親和力、線(xiàn)性范圍、特異性、純度、重復性/批間差和穩定性等作為抗體診斷原料的評估指標。

活性/效價(jià)/親和力

活性/效價(jià)/親和力是反應抗體與抗原之間反應性的直接指標。

大多數抗體供應商對于效價(jià)的檢測是利用直接/間接ELISA方法測定抗體與重組或者天然抗原反應，通過(guò)信號值對抗體診斷原料的活性進(jìn)行考察。但是需要注意，并不是高親和力的抗體就一定對應為高性能的免疫檢測分析系統。不同種類(lèi)的標志物對于親和力的要求有一定區別，具體討論將在線(xiàn)性指標中詳細展開(kāi)討論。

線(xiàn)性范圍

線(xiàn)性范圍是指分析方法在給定范圍內獲取與樣品中待測物濃度成正比的試驗結果的能力，是反映分析方法檢測范圍和準確性的直接指標。線(xiàn)性范圍的確定需要再預期范圍內選擇7-11個(gè)濃度水平，然后依據實(shí)驗結果逐漸減少數據點(diǎn)直至表現出線(xiàn)性關(guān)系，可發(fā)現最寬的線(xiàn)性范圍。

在活性/效價(jià)/親和力描述中提到，高親和力抗體診斷原料并不代表高性能試劑，針對不同種類(lèi)的標志物，對于親和力的需求有一定差異。這是因為有些待測標志物在體內的濃度范圍很寬，（如人絨毛膜促性腺激素(HCG)、肌紅蛋白(MYO)和C反應蛋白（CRP）等）如果是高親和力的抗體，那么會(huì )導致鉤狀效應的過(guò)早出現，提前進(jìn)入平臺期而引起信號下降，影響試劑盒的線(xiàn)性范圍，導至了高濃度樣本被嚴重低估，甚至可能導至醫療事故的產(chǎn)生。但是對于含量很低就能預示疾病且濃度范圍不寬的標志物，（如肌鈣蛋白（TnI）和降鈣素原（PCT）等）高親和力的抗體就具有檢出低值樣本的能力，也相應提高了檢測的靈敏度。

特異性

指抗體單一性識別某種特定抗原的能力。如何能在混合物中識別特定的抗原也是評估抗體的重要指標。特異性雖然不直接影響試劑整體反應性，但是卻對于檢測結果有著(zhù)很重要的影響。

血清中除了待測標志物之外，還存在許多其他分子。這些分子可能和待測物具有類(lèi)似的結構或構象；也可能與待測物存在共同的氨基酸片段。當抗體所識別的表位也存在于其他分子中時(shí)，便會(huì )導至測試結果的假陽(yáng)性或者假陰性。如心肌肌鈣蛋白（cTnI）和骨骼肌肌鈣蛋白（sTn）直接存在多段相同的氨基酸序列；促甲狀腺激素（TSH）、促卵泡生成激素（FSH）、促黃體生成激素（LH）和人絨毛膜促性腺激素（HCG）存在共同的α亞基等。肌紅蛋白（MYO）與血紅蛋白均具有血紅素核心、地高辛和洋地黃毒苷具有類(lèi)似的糖苷結構、糖抗原CA50和CA19-9均有Lewis-A糖抗原等。這既是抗體診斷原料特異性差所導至的結果，也可以理解為抗體識別的抗原表位不夠專(zhuān)一所致。因此，抗體的識別位點(diǎn)是決定抗原特異性的關(guān)鍵性因素。

純度

抗體的純度測定主要有SDS-PAGE電泳后的條帶掃描和HPLC測試等。以proteinA/G親和純化的方法可以獲得較高純度的抗體。

在體外診斷試劑制備過(guò)程中，抗體標記效率與抗體的純度有關(guān)。當抗體純度較低時(shí)，會(huì )導致抗體與其他雜蛋白被一起標記，從而影響了試劑的反應性能，如特異性、反應信號、背景值等?？贵w的純度通常由細胞培養工藝和抗體純化工藝所決定。使用無(wú)血清培養基可以很大程度上去除血清培養基中帶來(lái)的雜質(zhì)蛋白，而蛋白質(zhì)純化工藝則可以進(jìn)一步將抗體中絕大多數雜質(zhì)去除。

重復性/批間差

重復性是指每批次產(chǎn)品的可重復性。之前所述的一系列抗體性能對于體外診斷試劑的性能有直接影響，而重復性則是保證體外診斷試劑降低批間差異并且穩定生產(chǎn)的前提條件。另外，如前所述，重復性和生產(chǎn)工藝密切掛鉤，因此也是體現抗體診斷原料質(zhì)量的關(guān)鍵指標。（抗體診斷試劑重復性評估）

穩定性

是指在特定的儲存條件下，一定時(shí)間內抗體保持其活性的能力。在抗體修飾/偶聯(lián)前的穩定性是抗體真實(shí)的穩定性，修飾/偶聯(lián)后的抗體穩定性主要取決于制備工藝?？贵w診斷原料的保存條件對于抗體的穩定性至關(guān)重要，目前多數供應商提供的抗體的儲存條件為4或-20℃；常規抗體的稀釋液大多數為不含有其他蛋白和保護劑的緩沖液（抗體中若含有其他蛋白或者保護劑，會(huì )影響抗體的后續偶聯(lián)）。

對于37℃加速穩定性，有企業(yè)認為，試劑在37?C放置3d相當于4?C放置半年，37?C放置7d相當于4?C放置1年，半年的加速穩定性研究后可以將產(chǎn)品效期穩定性定為2年，這些說(shuō)法是缺乏科學(xué)依據的。由于體外診斷試劑結構組成比較復雜，可能同時(shí)存在多種降解途徑，不同條件下的降解、聚合、變性、失活，以及與包裝材料之間的相互作用等各不相同，所以一般情況下，加速穩定性研究只能用于產(chǎn)品一般性能研究，不能用于推導產(chǎn)品有效期。（穩定性研究方法介紹）

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