胃蛋白酶原（PG）的定量檢測方法
胃蛋白酶原（PG）是一種胃蛋白酶非活性前體，包含PGⅠ和PGⅡ兩個(gè)亞群。人體血清胃蛋白酶原的含量變化可反應胃粘膜的功能情況。血清PGⅠ和PGⅠ/PGⅡ（PGR）值下降是臨床早期胃癌篩選的有效指標。除了PG水平，臨床上還需結合患者體內G17水平、幽門(mén)螺桿菌（HP）水平以及胃鏡活檢等其他檢測結果才能做出準確的診斷。胃蛋白酶原的臨床定量檢測方法較多，目前主要有流式熒光發(fā)光免疫微球、時(shí)間分辨熒光免疫、乳膠增強免疫比濁、化學(xué)發(fā)光免疫分析、酶聯(lián)免疫吸附以及放射免疫分析等方法。
原理簡(jiǎn)介
1. 流式熒光發(fā)光免疫微球分析技術(shù)（Flow fluorenscence immunmicrobeads assay, FFIA）
該技術(shù)以熒光編碼微球和雙激光流式檢測技術(shù)為核心，通過(guò)熒光標記PG抗體溶液，加入檢測樣本，再加入交聯(lián)特異性捕獲抗體的熒光編碼微球懸液，形成夾心復合物（交聯(lián)捕獲抗體的編碼微球-PG抗原-熒光標記PG抗體復合物）。復合物被鞘液隔開(kāi)逐一通過(guò)激光檢測，通過(guò)不同的激光通道分別識別出編碼的微球和熒光標記PG抗體。編碼微球上的標記抗體熒光值與樣本中的PG抗原呈正比，再通過(guò)相應的校準品標準曲線(xiàn)計算出相應的樣本PG含量。
2. 時(shí)間分辨熒光免疫分析（Time-resolved fluoroimmunoassay, TRFIA）
在熒光分析的基礎上發(fā)展而來(lái)。利用鑭系元素熒光壽命長(cháng)的特點(diǎn)，根據波長(cháng)和時(shí)間進(jìn)行信號分辨，有效排除非特異性熒光。采用鑭系元素標記胃蛋白酶原抗原；與檢測樣本發(fā)生免疫反應，最后檢測熒光強度來(lái)判定樣品中抗原的水平。
3. 乳膠增強免疫比濁（Particle enhanced turbidimetric immunoassay, PETIA）
由免疫比濁的方法發(fā)展而來(lái)，分為散射比濁和透射比濁兩種檢測法。其原理相似，都是將單克隆PG抗體交聯(lián)到膠乳顆粒表面；加入檢測樣本，發(fā)生免疫反應，生成抗原-抗體-膠乳顆粒復合物；反應液的散光性或透光性能改變，其濁度變化程度與樣本中的胃蛋白酶原抗原濃度呈正相關(guān)。
4. 化學(xué)發(fā)光免疫分析（Chemiluminescence immunoassay, CLIA）
此方法原理是用發(fā)光物質(zhì)或酶標記PG抗體，與樣本中的胃蛋白酶原抗原反生免疫反應后，加入氧化劑或者酶底物而發(fā)光，通過(guò)檢測發(fā)光強度，根據標準曲線(xiàn)判定樣本中PG抗原濃度。其標記物主要有化學(xué)發(fā)光物質(zhì)、酶標記兩類(lèi)；常用標記物分別為吖啶酯類(lèi)化合物（AE）和辣根過(guò)氧化物酶(HRP)。
5. 酶聯(lián)免疫吸附試驗（Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）
常用的反應方式有雙抗夾心、競爭、間接、直接ELISA。其原理用酶標記的抗體或者抗原指示免疫反應，先將已知的抗原或抗體包被在固相載體表面，使免疫反應在固定相上進(jìn)行。通過(guò)酶底物顯色反應判定是否存在免疫反應，根據顏色深淺進(jìn)行半定量，目前常用標記物為HRP。
6. 放射免疫分析（Radioimmunoassay, RIA）
主要原理是競爭性抑制，利用放射性核素標記提純的PG抗原，待測樣本中的PG抗原與標記PG抗原共同與定量的PG抗體結合。反應平衡后，通過(guò)測定放射性強度，求得未標記的樣本PG抗原含量。
檢測方法比較
如表1所示，放射免疫分析由于其示蹤物質(zhì)具有放射性，所以應用受限，普適性差。ELISA成本低，可進(jìn)行定性和半定量，適用于基層醫院。近年來(lái)乳膠增強免疫比濁、化學(xué)發(fā)光免疫分析應用廣泛，這兩種方法成本相對較低，靈敏度高于ELISA，適用于大、中型醫院。流式熒光發(fā)光免疫微球和時(shí)間分辨熒光免疫分析靈敏度高，但成本高，檢測需要配備昂貴的儀器，適用于有條件的醫院。
表1 檢測方法比較
| 檢測方法 | 優(yōu)點(diǎn) | 缺點(diǎn) |
|---|---|---|
| FFIA | 靈敏度較高，可同時(shí)檢測多個(gè)指標，檢測效率高，可進(jìn)行高通量檢測。 | 顯色本底高，定量分析范圍受限。 |
| PCT | 早期嚴重全身性細菌感染。 | 局部感染和慢性感染。 |
| TRFIA | 示蹤物穩定，靈敏度較高，適用于超微量分析，定量分析量程寬，可排除非特異性熒光。 | 成本高，需要昂貴的檢測儀器；超微量分析時(shí)易受激發(fā)光的雜散光影響。 |
| PETIA | 穩定性好，成本相對低，普通生化分析儀即可檢測。 | 靈敏度較低。 |
| CLIA | 抗干擾能力強，成本相對較低。 | 檢測速度慢。 |
| ELISA | 成本低，適用于定性檢測。 | 適用于半定量。 |
| RIA | 靈敏度高，適于微量分析。 | 具有放射性，會(huì )對人體或環(huán)境造成污染；且不穩定，效期短不易保存，重復性差，不能廣泛應用。 |
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