新型冠狀病毒（2019-nCoV）檢測方法介紹-蛋白檢測
冠狀病毒外形呈球形，在病毒包膜外有明顯的棒狀膜外粒子，膜外粒子形狀酷似中世紀歐洲帝王王冠的結構，因此得名“冠狀病毒”。冠狀病毒主要由核酸基因（RNA）以及有基因編碼的外殼蛋白兩部分組成。外殼蛋白包括棘突蛋白（S蛋白）、包膜蛋白（E蛋白）、膜蛋白（M蛋白）以及核衣殼蛋白（N蛋白）組成。其結構圖如下：
2019新型病毒是目前發(fā)現的第七種感染人體的冠狀病毒。通過(guò)對新冠病毒編碼的蛋白進(jìn)行檢測，可判定患者是否被感染。蛋白檢測主要依賴(lài)于ELISA技術(shù)平臺及免疫層析技術(shù)平臺。
ELISA檢測平臺
ELISA（酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)）是利用酶的高效催化放大作用與特異性抗原-抗體反應相結合而建立的一種標記免疫技術(shù)。根據檢測原理的不同可分為直接法、間接法、雙抗夾心法、競爭法四種。2019-nCoV蛋白使用雙抗夾心法進(jìn)行檢測，其實(shí)驗流程為：
- 將配對抗體中的一株抗體固定至固相載體表面，并保持其免疫活性；
- 將另一株抗體與某種酶聯(lián)結成酶標抗體，此酶標抗體既保留其免疫活性，又保留其酶活性；
- 測定時(shí)將待測樣本固相載體孵育，形成抗原-抗體復合物，再通過(guò)洗滌將未與固相載體結合的物質(zhì)分開(kāi)；
- 加入酶標抗體，通過(guò)反應結合到固相載體上（此時(shí)固相載體上為“抗體-抗原-酶標抗體”復合物，即雙抗夾心）；
- 加入酶反應底物，底物被酶催化后顯色，根據顏色深淺可以定性分析是否含有2019-nCoV抗原。
免疫層析技術(shù)
免疫層析技術(shù)是20世紀90年代初在免疫滲濾技術(shù)的基礎上建立的一種簡(jiǎn)易快速的免疫學(xué)檢測技術(shù)。該技術(shù)利用了抗原抗體特異性結合的特性，首先將能夠同時(shí)結合同一抗原的一對抗體分別固定于免疫層析檢測試紙條的檢測線(xiàn)（T線(xiàn)）與結合墊上，結合墊上的抗體帶有顯色標記（熒光標記或膠體金標記）。在試紙條滴樣處滴加樣品，樣品會(huì )向試紙條另一端流動(dòng)，當流動(dòng)至結合墊，樣品中的抗原會(huì )和結合墊上的標記抗體結合，形成“標記抗體-抗原”復合物，當樣品流動(dòng)至檢測線(xiàn)時(shí)，抗原會(huì )被T線(xiàn)上的抗體捕獲，形成“標記抗體-抗原-捕獲抗體”復合物，隨著(zhù)T線(xiàn)上捕獲抗原的不斷增加，T線(xiàn)會(huì )出現愈加明顯的顏色變化。如果T線(xiàn)出現顏色變化，則說(shuō)明待測樣本中含有待測抗原。
常見(jiàn)檢測平臺
- 1. 膠體金平臺
- 2. 免疫熒光平臺
ELISA檢測與免疫層析檢測方法對比
ELISA檢測具有技術(shù)可靠、試劑方便易得、靈敏度更高等優(yōu)點(diǎn)，免疫層析檢測具有測定更為方便、快速、不需要儀器，隨到隨測等優(yōu)點(diǎn)。
| 免疫層析 | ELISA | |
| 固相載體 | NC膜 | 聚苯乙烯等 |
| 標記物 | 膠體金/熒光標記 | 酶 |
| 敏感性 | 比ELISA高 | 高 |
| 實(shí)驗流程 | 簡(jiǎn)單 | 較簡(jiǎn)單 |
| 試劑盒制備難度 | 高 | 較高 |
參考文獻
[1]. Xintian Xu.Evolution of the novel coronavirus from the ongoing Wuhan outbreak and modeling of its spike protein for risk of human transmission.SCIENCE CHINA Life Sciences.2020
[2]. Buss H , Chan T P , Sluis K B , et al. Protein Carbonyl Measurement by a Sensitive ELISA Method[J]. Free Radical Biology and Medicine, 1997, 23(3):361-366.
[3]. 隋菊英. 膠體金免疫層析法和ELISA法在HBsAg檢測中的方法學(xué)評價(jià)[J]. 中國醫藥導報(36):81-82.
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